說(shuō)到RNA提取試劑盒你對(duì)它真的了解了嗎？

　　RNA提取試劑盒用于從細(xì)胞、組織、新鮮血液和病毒中提取200bp及以下的smallRNA，用LB10裂解樣品后，加入氯仿，溶液分為無(wú)色水相和粉紅色有機(jī)相，RNA在水相中；用RNA硅膠膜離心柱特異地吸附水相中的大分子量RNA(28SrRNA,18SrRNA,mRNA），流出液中的smallRNA用miRNA硅膠膜離心柱特異地吸附。與其它miRNA提取方法相比，該試劑盒裂解能力強(qiáng)、提取量高、專一性強(qiáng)，應(yīng)用范圍廣。

　　RNA提取試劑盒其主要特征在于分離裝置中采用纖維素為固相載體，利用融合蛋白CBD-SA作為生物橋聯(lián)劑，以生物特異性偶聯(lián)法代替?zhèn)鹘y(tǒng)的物理吸附法和化學(xué)鍵合法活化纖維素固相載體，活化后的固相載體能夠高效率的結(jié)合生物素化的試劑，可用于蛋白或核酸的分離。構(gòu)建cDNA文庫(kù)、蛋白質(zhì)的體外翻譯和RT-PCR方法檢測(cè)稀有的mRNA等研究常常需要從總RNA中分離mRNA，mRNA只占總RNA的1%左右，但由于帶poly(A)尾巴，所以可以通過(guò)與Oligo(dT)的親和結(jié)合而與其RNA（如rRNA、tRNA等）分離開。

　　RNA提取試劑盒使用方法：將0.5mL結(jié)合液加入到一管裝有1mgOligo(dT)纖維素的離心管中，放置5分鐘后離心吸棄上清后待用。將制備的總RNA100μL加熱到65℃5分鐘后加入等體積的結(jié)合液，轉(zhuǎn)移到裝有Oligo(dT)纖維素的離心管中，顛倒混勻數(shù)次，離心后將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)離心管中。用0.5mL結(jié)合液，混勻后4℃200g離心5分鐘，小心棄上清。重復(fù)上步洗3-5次，用RNase-free水洗脫mRNA，用微量核酸沉淀劑沉淀回收mRNA。