PEI線性轉(zhuǎn)染試劑特點(diǎn)及常見(jiàn)問(wèn)題

一、PEI線性轉(zhuǎn)染試劑

PEI又稱為線性化聚乙烯亞胺，是人工合成的含有高密度正電荷的有機(jī)大分子陽(yáng)離子聚合物。PEI與DNA通過(guò)正負(fù)電荷的相互吸引形成復(fù)合物，是較為有效的聚陽(yáng)離子型基因載體，轉(zhuǎn)染效率高。PEI轉(zhuǎn)染試劑可以方便地進(jìn)行化學(xué)修飾，并且不會(huì)像脂質(zhì)體一樣破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，所以相對(duì)毒性較低。

二、PEI Max轉(zhuǎn)染試劑(24765-1)特點(diǎn)

·轉(zhuǎn)染效率高，細(xì)胞毒性低；

·蛋白表達(dá)量高；

·節(jié)約成本：PEI至少能夠降低40%的轉(zhuǎn)染試劑總成本；

·適用于HEK293等真核細(xì)胞的轉(zhuǎn)染；

·適用于貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染；

·適用于有血清和無(wú)血清的轉(zhuǎn)染條件；

·無(wú)機(jī)試劑，無(wú)動(dòng)物源成分；

·產(chǎn)品穩(wěn)定，質(zhì)控嚴(yán)格；

·工藝流程適用范圍廣，容易優(yōu)化，適合小規(guī)模培養(yǎng)板、培養(yǎng)瓶到大規(guī)模的生物反應(yīng)器。

三、PEI轉(zhuǎn)染試劑性能

圖1 轉(zhuǎn)染PEI后的抗體表達(dá)

500mL HEK293細(xì)胞(A、C、E)和CHO細(xì)胞(B、D、F)細(xì)胞培養(yǎng)物轉(zhuǎn)染LPEI、PEI Max和PEI pro^TM。采用蛋白-A HPLC法檢測(cè)單克隆抗體曲妥珠單抗(A、B)、Palivizumab單抗(C和D)和B72-3(E和F)的滴度，與LPEI(PEI 25K)相比，當(dāng)使用PEI Max和PEI pro^TM時(shí)，三種抗體的表達(dá)量都較高，但使用PEI Max試劑轉(zhuǎn)染能使所有抗體都有最高表達(dá)。由此可見(jiàn)，PEI Max轉(zhuǎn)染試劑(MW 40000)具有更高的轉(zhuǎn)染效率。

四、轉(zhuǎn)染中的常見(jiàn)問(wèn)題

1.轉(zhuǎn)染效率低

原因：(1)細(xì)胞活力：使用活力好傳代小于15代的細(xì)胞。

(2)細(xì)胞接種密度高/低：適當(dāng)降低/增加接種密度。

  (3)PEI/DNA比率不合適：進(jìn)行不同基因轉(zhuǎn)染時(shí)應(yīng)對(duì)PEI和DNA的比例進(jìn)行優(yōu)化，以達(dá)到最適比例。

(4)質(zhì)粒片段較大：可根據(jù)實(shí)際實(shí)驗(yàn)需要調(diào)整，如適當(dāng)增加轉(zhuǎn)染質(zhì)粒總量等。

  (5)混合方式不當(dāng)：質(zhì)粒DNA和PEI溶液混合時(shí)避免渦旋。同時(shí)要注意PEI加入 DNA溶液中的順序。

2.細(xì)胞毒性高

原因：(1)轉(zhuǎn)染液孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)：過(guò)長(zhǎng)時(shí)間 PEI/DNA 復(fù)合體會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞毒性。

(2)細(xì)胞接種密度低：適當(dāng)增加接種密度。

(3)PEI/DNA比例高：優(yōu)化合適的PEI和DNA的比例。

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