核酸提取(磁珠法)常見的六大問題

核酸提取的方法很多，如煮沸裂解法、酚氯仿抽法、濃鹽法、陰離子去污劑法、異硫氰酸胍/苯酚法（Trizol法）、CTAB法原理（植物DNA提取經(jīng)典方法）、離心柱純化、磁珠法提取等，今天我們來看看核酸提取(磁珠法)常見的六大問題，從而更好的了解磁珠法提取核酸。

Q：是不是誤區(qū)越多，提取效果越好？

A：不是，磁珠的主要特點是既可以分散于液體中，也可以在外加磁場作用下以固態(tài)方式和液相分離，ren何試劑體系，磁珠和液體的比例都應(yīng)該是有一定閾值的，超過一定的比例，過多的磁珠將因為無法均勻分散于液體中，而喪失其分散的特性，也使得洗滌過程中無法充分增加核酸磁珠和液體接觸的效率。而過量的磁珠也會吸附更多的雜質(zhì)，對于除雜的效果影響非常大。甚至有些時候，過多的磁珠會吸附蛋白酶、溶菌酶等在液體體系中起主要作用的功能成分，導(dǎo)致整個試劑盒效率低下。有很多時候，在提取效果不佳的時候，減少磁珠使用量，反而是提升提取效果的最you途徑。
通常情況下，磁珠法試劑盒給出的參考磁珠用量都是略微過量的，因此需要增加磁珠用量改善吸附效率的情況并不多，但如果確定是磁珠用量不足導(dǎo)致的提取效果不好，是可以在一定范圍內(nèi)通過增加磁珠用量來改善提取效果的。

Q：試劑使用的越多，是不是提取效果就會越好？

A：裂解效果不好?多加點裂解液。洗滌效果不好?多加點洗滌液。這是很多客戶在使用試劑盒中的慣性思維。
但是對于磁珠法而言，每增加一部分液體體積，就減少了更多的磁珠碰撞幾率，而降低磁珠碰撞幾率，會導(dǎo)致吸附率的大幅度下降。所以很多時候，雖然增加裂解液和洗滌液確實能夠起到增強(qiáng)裂解和增強(qiáng)洗滌的作用，但磁珠法提取的核心是磁珠吸附核酸的效率，無法保證磁珠碰撞效率是不能保證核酸提取效率的，所以單純增加試劑使用量改善提取效果并不一定wan全有效。

Q：是不是洗滌次數(shù)越多，提取的效果就會越好？

A：提取得到的核酸雜質(zhì)過多時，使用者會考慮多進(jìn)行幾次洗滌，以得到更為純凈的核酸。增加洗滌次數(shù)確實有利于提純核酸，但考慮到每次洗滌都會損失一定量的核酸，且增加了核酸斷裂水解的可能性，所以一般來說洗滌次數(shù)控制在2~4次為宜。

Q：取用的樣本越多，提取的效果就會越好？

A：在樣本不夠新鮮或者核酸含量本身就很少的情況下，往往核酸提取效果不好，很多老師就會采用多取樣本的方式增加核酸提取量。
但簡單地增加樣本取樣量，有時會引入過多的雜質(zhì)，超出裂解液裂解能力，也會使提取效率降低，所以并不推薦通過簡單的增加樣本取樣量的方式來達(dá)到增加提取量的目的。如果確實是由于樣本量不足而引起的提取量過低，建議在前處理先經(jīng)過富集或者濃縮步驟再開始提取。或者增加裂解的wan全性，使更多的核酸暴露出來也是一種解決方法。

Q：某一種磁珠使用效果好，是不是其他實驗也可用？

A：磁珠的種類是多種多樣的，粒徑大小不同，分散性不同，磁響應(yīng)時間不同，包被基礎(chǔ)基質(zhì)不同，外層修飾官能團(tuán)不同，包被密度不同，官能團(tuán)臂長不同，會導(dǎo)致磁珠特性千差萬別。所以不同磁珠所適應(yīng)的實驗和體系也是不同的。就像同樣是核酸提取的試劑，配方也并不wan全相同，同樣應(yīng)用于核酸提取的磁珠，性質(zhì)也并非wan全一致。有的磁珠在常量核酸提取中表現(xiàn)出了更高的吸附效率，有的磁珠更適用于微量核酸提取。有的磁珠適合偏酸性系列的試劑體系，有的磁珠適合偏堿性系列的試劑體系。有的磁珠磁響應(yīng)性好但是沉降速度快，更適合磁棒式自動提取儀;有的磁珠沉降速度慢但是磁響應(yīng)時間長，更適合移液式自動提取儀。很少有一種磁珠能適用于所有實驗的情況，除了固定的試劑盒配合，多數(shù)情況下，磁珠和試劑體系都要做一定時間的配合調(diào)整。

Q：和某種試劑盒對比，磁珠的使用效果不佳，是磁珠的問題嗎？

A：很多客戶在篩選磁珠過程中都是在已經(jīng)成熟試劑體系下，簡單地等量替換磁珠，用于比較磁珠效果。這樣就會很容易得出某種磁珠效果不好的結(jié)論，但實際上，由于不同磁珠適合的體系和用量是不同的，往往需要調(diào)整過后才能獲得更好的提取效果。

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