磁珠法核酸提取都分為哪幾個(gè)步驟？

核酸作為一切分子生物學(xué)研究的基礎(chǔ)，其提取通常是開啟生物學(xué)研究的第一步，而且提取的核酸質(zhì)量高低也是決定下游實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵因素之一。常見的核酸提取方法有酚氯仿抽提法、高鹽沉淀法、柱式法和磁珠法，其中，磁珠法核酸提取都分為哪幾個(gè)步驟？讓我們一起來看看吧！

第一步：裂解

核酸必須從細(xì)胞或其他生物物質(zhì)中釋放出來，細(xì)胞裂解可通過機(jī)械作用、化學(xué)作用、酶作用等方法實(shí)現(xiàn)。其中，酶作用主要是通過加入溶菌酶或蛋白酶（蛋白酶K、植物蛋白酶或鏈霉蛋白酶）以使細(xì)胞破裂，核酸釋放。蛋白酶還能降解與核酸結(jié)合的蛋白質(zhì)，促進(jìn)核酸的分離。

第二步：結(jié)合

磁珠表面帶負(fù)電荷，磁珠buffer是高鹽環(huán)境有帶正電荷的鹽離子，樣本被buffer影響，磷酸基團(tuán)帶負(fù)電荷。

第三步：洗滌

核酸的高電荷磷酸骨架使其比蛋白質(zhì)、多糖、脂肪等其他生物大分子物質(zhì)更具親水性，根據(jù)它們理化性質(zhì)的差異，用選擇性沉淀、層析、密度梯度離心等方法可將核酸分離、純化。

用無水乙醇沉淀DNA，這是實(shí)驗(yàn)中最chang用的沉淀DNA的方法。乙醇的優(yōu)點(diǎn)是可以任意比和水相混溶，乙醇與核酸不會起任何化學(xué)反應(yīng)，對DNA很安全，因此是理性的沉淀劑。當(dāng)加入乙醇時(shí)，乙醇會奪去DNA周圍的水分子，使DNA失水而易于聚合。

第四步：洗脫

加水或者EB破壞高鹽環(huán)境，形成低鹽環(huán)境，使DNA從磁珠上脫落。

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