Elabscience Caspase 1活性檢測試劑盒的原理與注意事項

Elabscience®自主研發的 Caspase 1 Activity Assay Kit 采用分光光度法，可用于檢測細胞、組織裂解液或其它樣本的caspase 1活性。Caspase 1 也稱 interkeukin 1β conberting enzyme (ICE)，是caspase 家族中唯yi可以剪切 IL-1β 前體蛋白或 IL-18 前體產生相應成熟的細胞因子的 caspase。那么你知道Elabscience Caspase 1活性檢測試劑盒的原理與注意事項嗎？讓我們一起來看看吧！

一、檢測原理

Elabscience Caspase 1活性檢測試劑盒是基于 caspase 1 可以催化底物Ac-YVAD-pNA 產生黃色的 pNA (p-nitroaniline)，pNA 在 405nm 附近有強吸收，從而可以通過測定吸光度來檢測 caspase 1 的活性。

二、保存條件

-20°C 可保存一年。Ac-YVAD-pNA (4 mM)應適當分裝并避光保存，避免反復凍融。

三、注意事項

1. 所有待檢樣本都需檢測蛋白濃度，由于樣本裂解液中含有還原劑，不適合使用 BCA 法進行蛋白濃度測定，推薦使用考馬斯亮藍法（Bradford 法）。

2. 建議在正式實驗前，選擇2~3個預期差異大的樣本進行預實驗，若樣本吸光值超過標準曲線的測量范圍，則需稀釋樣本或者調整上樣量再進行測定。

3. 進行caspase 1活性測定的樣本，其蛋白濃度應在1~4 mg/mL，否則會影響實驗結果的準確性。

4. 一次實驗的細胞數目建議不低于 1×106個，組織樣本不低于50mg，以便達到1~4 mg/mL的蛋白濃度。否則會影響實驗的精準度，導致蛋白濃度過低，反應體系內活性 caspase 1過少而OD值偏低。

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