一文了解Solarbio索萊寶WB-考馬斯亮藍染色法

一、Solarbio索萊寶WB-考馬斯亮藍結構

考馬斯亮藍R-250和G-250染料是二磺酸化三苯基甲烷化合物的兩種化學形式，結構上R-250比G-250少了2個甲基。命名上“R"為Red的縮寫，因R-250的藍色染料呈微紅色；命名上“G"為Green 的縮寫，因G-250的藍色染料泛淺綠色，也稱為膠體考馬斯亮藍（見下文）；“250"表示考馬斯亮藍的純度。

其中R-250因少兩個甲基，與蛋白質反應比較緩慢，染色耗時較長，但是容易被洗脫下去，所以常用作凝膠電泳中蛋白質條帶染色的基礎染料。而G-250因為多兩個甲基，與蛋白質的結合反應十分迅速，且形成有色復合體較為穩定，不容易洗脫，常用于蛋白定量的Bradford 法測定試劑；也可染膠，但其脫色時間較長、脫色困難，背景較高，長時間在水中脫色容易使凝膠吸水膨脹甚至破碎。

二、Solarbio索萊寶WB-考馬斯亮藍染色蛋白質染料要求

用染料和生物大分子結合形成有色的復合物是電泳后檢測的方法。選用染料通常應考慮以下要求：
1. 必須與大分子結合以形成一個不溶性的，有色的，緊密的復合物，但不結合到凝膠中和支持膜上，以便從凝膠中除去，否則高背景會影響蛋白帶的辨別和定量掃描。
2. 染料必須容易溶解在對大分子沒有影響的溶劑中，以利于背景的脫色。
3. 選用高吸光系數的染料有利于提高定量測定的靈敏度。
4. 選用能與大分子有專一性結合的染料，并在結合后能產生不同的顏色（如熒光)，可以提高檢測的選擇性和靈敏度。

早期用于蛋白染色的染料是氨基黑10B，是一種含有兩個磺酸基團的酸性重氮化合物，所以能與堿性氨基酸殘基結合進而實現蛋白質染色。但其對SDS-蛋白質染色效果不好；此外，氨基黑10B對不同蛋白質染色時，著色度不等、色調不一(有藍、黑、棕等)；染色靈敏度低，進行凝膠定量掃描時，誤差較大。 考馬斯亮藍染料是二磺酸化三苯基甲烷化合物，每個分子也含有兩個磺酸基團，也能與堿性氨基酸殘基結合進而實現蛋白質染色，其次，還可通過染料的疏水性殘基和蛋白質的疏水性區域的作用產生疏水性力，同時也存在氧鍵和范德華力的作用?？捡R斯亮藍染色靈敏度比氨基黑高5倍， 并且適用于SDS-PAGE電泳微量蛋白質染色，此外與不同蛋白結合呈現基本相同的顏色，并且在比較寬的范圍內 ，掃描峰的面積與蛋白量有線性關系。

三、Solarbio索萊寶WB-考馬斯亮藍染色考染的應用

考馬斯亮藍又稱為Bradford法，是一種常用的蛋白定性定量分析方法。其主要利用Coomassie Brilliant Blue G-250這種酸性染料與蛋白質在酸性環境下產生吸附,導致染料的最大吸光波長從465 nm變為595 nm。通過制備不同濃度的牛血清白蛋白標準品液,與Bradford試劑混合后測定其595 nm吸光度值,繪制標準曲線。與標準品同量的樣品蛋白溶液與Bradford試劑混合。5 min后在595 nm波長下測定各樣品與標準品的吸光度。根據標準曲線,計算出各樣品的蛋白濃度。

此外，考馬斯亮藍（Coomassie Brilliant Blue）與麗春紅染色一樣，也是WB實驗中常用的染色方法。通常情況下考馬斯亮藍用于染SDS-PAGE凝膠以評估電泳和轉膜條件是否合適（在電泳完成后染色可以根據凝膠上條帶的位置形狀初步判斷蛋白的遷移情況；在電轉完成后進行該染色可初步判斷蛋白是否有殘留，幫助實驗人員判斷轉膜條件是否合適），而麗春紅染色則主要用于染膜以初步評估轉膜效率及不同組間蛋白表達情況。

四、Solarbio索萊寶WB-考馬斯亮藍染色步驟

（1）電泳結束后，將膠板取出放入加有超純水的平皿中潤洗，以去除殘留電泳液。

（2）之后加入考馬斯亮藍染液浸沒，放至水平搖床室溫30 min或更長時間進行染色（具體根據凝膠厚度和溫度進行調整），直至凝膠與染色液顏色十分接近。

（3）棄去染色液或回收染色液（可回收使用3次左右）。

（4）脫色直至背景清晰。

五、Solarbio索萊寶WB-考馬斯亮藍部分產品表

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