這些測序方法，你知道嗎？

測序，測的是DNA的序列，也就是測定DNA中脫氧核糖核苷酸的排列順序，它是將DNA化學信號轉變為計算機可處理的數字信號的一個過程，我們能從這些經過科學計算得出的數字信號中找尋到生命之間的奧秘。根據測序技術出現的時間以及讀長、通量等特征，分為一代測序、二代測序、三代測序。下面的這些測序方法，你知道嗎？讓我們一起來看看吧！一、一代測序一代測序技術，也被稱為Sanger測序。其利用了雙脫氧核苷酸會終止PCR的原理。比如：一條序列為ATCGCTA，我們進行3次的雙脫氧核苷酸，第一次加...

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NGS測序之文庫構建

由于二代測序讀長的限制，不可能一下將一個很長的基因序列測通，因此需要先將長基因序列隨機片段化成小片段，這樣的話，這些片段就可以覆蓋整個基因組。所以需要構建文庫。一、文庫構建的步驟文庫構建大致步驟類似，但是各有各自du特的點，例如，RNAseq里miRNA，lncRNA，mRNA方法各有差異，具體方法以后有機會再補充。這里以Illumina的PE文庫為例，其流程圖如下圖。二、文庫構建詳細步驟（1）DNA片段化（FragmentDNA）使用超聲、酶或者加熱的方式將DNA樣品打碎成...

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NGS測序為什么需要文庫構建?

NGS即Next-generationsequencing，又叫第二代測序技術或者高通量測序技術或者下一代測序技術。文庫是DNA/RNA樣本在測序前做的一系列準備，因為原始的核酸樣本無法直接用于測序，只有經過處理的樣本才能滿足測序平臺的要求，比如在DNA樣本兩端添加測序bi備的接頭；樣本量不足時，可以通過PCR擴增達到上機的要求等。NGS測序為什么需要文庫構建?讓我們一起來看看吧！一、DNA文庫構建的內容（1）片段化及末端修復（2）加接頭（3）PCR注意：此處忽略磁珠純化的步...

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凍存細胞后續如何處理？

凍存細胞在收到貨后，后續如何進行處理呢？如何復蘇呢？一文讓你了解清楚！一、收到凍存細胞如何處理收到凍存細胞后，請打開包裝箱，檢查箱內干冰是否充足，凍存管是否融化，若已經融化，請拍照留存，并聯系客服，若無異常，請及時將凍存管置于超低溫冰箱內保存，若長時間不使用，必須在超低溫冰箱內過夜后轉移至液氮中保存。二、凍存細胞如何復蘇取100mm培養皿并做好標記，加入預熱好的12ml完quan培養基，將凍存管放入37℃水浴鍋中，輕輕搖晃凍存管，待細胞懸液完quan溶解后，轉移至安全柜中操作...

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細胞穩定轉染和瞬時轉染有哪些區別？

在細胞實驗中，細胞轉染是一項常用的技術，用于引入外源基因、表達蛋白或沉默目標基因等。其中，細胞的穩定轉染和瞬時轉染是兩種常見的轉染方式。細胞穩定轉染和瞬時轉染有哪些區別？讓我們一起來看看吧！類別特點適用范圍穩定轉染長期穩定表達目標基因長期功能研究和穩定表達需求的實驗可通過篩選和擴增獲得穩定表達的細胞系長期細胞培養和細胞系建立使用脂質體、病毒載體或DNA轉染等方法大規模蛋白表達和基因敲入研究瞬時轉染快速實現臨時的基因表達短期功能研究和臨時表達需求的實驗無需篩選和擴增細胞系短期細...

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