分子實(shí)驗(yàn)中DNA連接酶的作用機(jī)制

DNA連接酶(DNAligases)是一類重要的酶，在DNA復(fù)制、修復(fù)和重組過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。一、ATP依賴性連接在真核生物的連接酶如DNA連接酶I中，連接反應(yīng)是ATP依賴性的。ATP的水解驅(qū)動(dòng)了DNA鏈的連接。連接反應(yīng)主要發(fā)生在DNA雙鏈斷裂的末端。T4DNA連接酶是典型的ATP依賴性連接：（1）原理與特點(diǎn)：T4DNA連接酶是一種來自噬菌體T4的連接酶，其主要原理是在DNA鏈斷裂的末端引入磷酸二酯鍵，將兩個(gè)DNA片段連接起來。它需要ATP作為輔助能量。（2）優(yōu)點(diǎn)：T4DN...

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分子實(shí)驗(yàn)中DNA連接酶的作用原理

DNA連接酶(DNAligases)是一類重要的酶，在DNA復(fù)制、修復(fù)和重組過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。它們的主要功能是連接DNA鏈上的磷酸二酯鍵，形成完整的DNA雙鏈。這一過程對于維持基因組的完整性和穩(wěn)定性至關(guān)重要。DNA連接酶的基本作用原理是通過催化DNA鏈的連接，以形成連續(xù)的磷酸二酯骨架。連接過程通常包括以下三個(gè)步驟：（1）底物識別DNA連接酶識別DNA分子中需要連接的兩個(gè)斷裂部位(通常是5'末端和3'末端)。（2）磷酸基團(tuán)的激活在連接前，DNA連接酶通常需要結(jié)合ATP(腺苷三...

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抗體抗原測定的Elisa方法

在醫(yī)學(xué)臨床、生物學(xué)研究上，用于測定各種各樣的抗原、半抗原和抗體，Elisa法為雜交瘤細(xì)胞株的篩選提供了簡便、靈敏、快速的測定方法。那讓我們一起來看看抗體抗原測定的Elisa方法吧！抗體抗原測定的Elisa方法一：直接法1、將抗原吸附在固相載體表面；2、添加一種封閉試劑，防止檢測抗體出現(xiàn)非特異性結(jié)合；3、添加直接偶聯(lián)某種酶（如HRP）的檢測抗體。該檢測抗體將結(jié)合抗原，并且剩余的抗體會(huì)從孔中洗掉；4、添加這種酶的底物；5、短暫孵育后，在酶標(biāo)儀上測定每個(gè)孔的信號。抗體抗原測定的El...

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Elisa檢測之組織樣本的處理方法

Elisa是一種快速、靈敏、準(zhǔn)確可靠的定性定量分析方法。樣本的處理對于Elisa實(shí)驗(yàn)的成功起著關(guān)鍵的作用。組織樣本一般制成組織勻漿，處理方法如下：(1)使用干凈的工具解剖目標(biāo)組織，盡快置于冰上，以防被蛋白酶降解。（暫時(shí)不處理的組織，置于圓底微量離心管中，浸入液氮中“速凍”，在-80℃下存儲樣品備用）。(2)用預(yù)冷的PBS緩沖液（0.01M，pH=7.4）洗滌組織去除殘留的血液，稱重后備用。若組織塊較大，需先剪碎。(3)在冰上用研磨緩沖液（常用PBS緩沖液，但最好使用50mMT...

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細(xì)胞培養(yǎng)到底選用培養(yǎng)瓶？培養(yǎng)皿？還是培養(yǎng)板？

細(xì)胞培養(yǎng)到底選用培養(yǎng)瓶？培養(yǎng)皿？還是培養(yǎng)板？這個(gè)問題的答案是：根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮托枰獊磉M(jìn)行選擇！來讓我們一起看看培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿和培養(yǎng)板的選擇吧！一、培養(yǎng)瓶如果實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖桥囵B(yǎng)原代細(xì)胞和常規(guī)的傳代細(xì)胞，一般選擇用培養(yǎng)瓶，可獲得大量實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞。培養(yǎng)瓶是通過表面積來命名的，例如T25、T75、T175，數(shù)字就是表面積，T25就是25cm2，T75就是75cm2，T1755就是175cm2。常見的細(xì)胞培養(yǎng)瓶分為一次性的塑料瓶和玻璃瓶，他們各有特色。玻璃瓶的優(yōu)點(diǎn)是：成本低、透光性強(qiáng)、可重復(fù)使...

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